1. 实验目的

（1）学习荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B₂的分析原理。

（2）掌握970CRT荧光光度计的操作技术。

2. 实验原理

维生素B₂，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素B₂易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂。在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

维生素B₂水溶液在430~440nm蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535nm，在pH 6~7的溶液中荧光强度最大，在pH 11的碱性溶液中荧光消失。

多维葡萄糖中含有维生素B₁，B₂，C，D₂及葡萄糖均不干扰维生素B₂的测定。

由于维生素B₂在碱性溶液中经光线照射，会发生光分解而转化为光黄素，后者的荧光比核黄素的荧光强的多。因此，测量维生素B₂的荧光时，溶液要控制在酸性范围内，且须在避光条件下进行。

3. 仪器与试剂

970CRT荧光分光光度计。

10μg/mL维生素B₂标准溶液：准确称取10.0mg维生素B₂，用热蒸馏水溶解后，转入1L棕色容量瓶中，冷却后加蒸馏水至标线，摇匀，置于暗处保存。

冰乙酸（AR）；多维葡萄糖粉试样。

4. 实验步骤

(1) 标准曲线的绘制

于6只50mL容量瓶中，分别加入10μg/mL维生素B₂标准溶液0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00mL，再各加入冰乙酸2.0mL，加水至标线，摇匀。在970 CRT荧光分光光度计上，用1cm荧光比色皿于激发波长440nm，发射波长540nm处，测量标准系列溶液的荧光强度。

(2) 多维葡萄糖粉中维生素B₂的测定

准确称取0.15~0.2g多维葡萄糖粉试样，用少量水溶解后转入50mL容量瓶中，加冰乙酸2mL，摇匀。在相同的测量条件下，测量其荧光强度。平行测定三次。

5. 实验记录及数据处理

以相对荧光强度为纵坐标，维生素B₂的质量为横坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查出待测试液中维生素B₂的质量，并计算出多维葡萄糖粉试样中维生素B₂的百分含量。

6．思考题

1. 试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因。